一、反硝化细菌富集培养
（1）培养基成分及其制备：
KNO3 2克
柠檬酸钠5 克
K2HPO4 1 克
KH2PO4 1 克
MgSO4·7H2O 0.2 克
陈海水（或蒸馏水）1000 毫升
将上面成分溶解于水，调pH 为7.2-7.6，分装于试管或烧瓶．于121 ℃ 蒸汽下灭菌20 分钟。
（2）接种与结果观察：在装富集培养液的试管中分别加少量的海泥或池泥．河泥，在20℃ 或25-30℃ 下培养5-15 天或3-10天。若培养液变混浊，有气泡产生，说明有反硝化菌生长，或检验其有无氨和亚硝酸产生，则可判定是否有反硝化细菌生长．
二、反硝化细菌分离培养
（1）分离培养基成分及制备．
葡萄糖1克
酒石酸钾钠10 克
KNO3 2 克
K2HPO4 0.2克
CaCl·2H2O 0.5 克
陈海水或蒸馏水1000毫升
将上述盐类溶于水中，调pH 为7.4-7.6，装于烧瓶中，121℃ 蒸汽下灭菌20 分钟．
（2）接种与结果观察：
① 将上述培养液倾入硅酸胶平板上，于50 ℃ 下烘烤至表面无水流动，不宜过干，以免破裂．
② 用富集培养物涂布接种于烘烤后的平板培养基上。
③ 于适温厌氧条件下培养至长出足够大的菌落．
④ 观察菌落形态，作革兰氏染色，油镜下观察其反应及菌体形态．
⑤ 挑取菌落于液体培养基上培养，检验其培养基中有无硝酸盐（用二苯胺试剂检验）和亚硝酸盐（用锌-碘-淀粉或格里斯试剂检查，见硝化细菌的富集与分离）存在，若硝酸根或亚硝酸根消失，可确定所分离细菌属反硝化细菌．
反硝化细菌的种类很多。它们主要属于革兰氏染色负反应，不生芽孢的杆菌，并都属兼、嫌气性细菌，在通气不良的情况下，可完全利用硝酸盐或亚硝酸盐中的氧来氧化所需的有机物。即对硝酸盐和亚硝酸盐起反硝化作用也就是对它们起还原作用
你要设计试验培养都是异养，所以用有机碳源微生物培养基，放相应的碳源、氮源、生长因子、无机盐和水但注意硝化、反硝化菌的区别 ，硝化细菌是需氧型，反硝化细菌是厌氧型。
