保菌先加菌液。
甘油保存菌种：取需要保存菌种的菌液与80%灭菌之后的甘油按照菌液：甘油=5:2的比例混合，零下70度保存（零下20度保存时间较短）。
甘油管冷冻保藏法是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
灭菌之后的甘油与菌种混合之后可以选择零下20度保存或者零下70度保存，一般实验室选择零下20度保存就可以了，零下20度保存时间可以达到一年左右，零下70度保存的时间更久，当然保存条件也更为苛刻，针对一般实验室来说取用也不方便。
1、菌种保存方法-20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80，800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后，充分混匀后，-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)
2.菌种保存方法-将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管，4～6h增菌后，加入适量甘油一生理盐水保存液，-20℃冰箱保存链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管，在5％～10％CO2中经8～10h增菌后，加入适量保存液，80℃低温冰箱保存真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤，不做培养，加入保存液后，-20℃冰箱保存。结果在连续3年实验期内，各菌种保存效果良好，且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。结论使用甘油生理盐水保存法来保存菌种，各菌种保存时间长，方法简便，特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。
3.菌种保存方法-常用的是终浓度10-30%的甘油。
由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度50%的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。使用时按50%甘油:菌液=1:1混合均匀，然后迅速冻结。
A.先把甘油稀释成50%，然后灭菌
这样20%的终浓度用400微的菌体加600微的50%甘油混合不就可以啦
纯的甘油太粘稠啦，用枪不好吸的
B.终浓度15%。甘油配成80%的浓度，到时候加800微升菌体，200微升甘油就好。
